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Blotting-Techniken beinhalten die Trennung (über Elektrophorese) und den Transfer von DNA, RNA oder Proteinen auf eine Blotting-Membran. Für den Nachweis folgt auf diese Trennung und Fixierung im Allgemeinen die Hybridisierung des Ziels mit einem markierten Molekül. Southern-Blotting wird verwendet, um auf spezifische DNA-Sequenzen auszuwerten und kann bei der Identifizierung genetischer Mutationen und in der Forensik verwendet werden. Northern Blotting konzentriert sich auf RNA-Sequenzen und ist hilfreich bei der Beurteilung von Genexpressionen. Western Blotting identifiziert Proteine und Antikörper und findet Anwendung bei der Diagnose von Infektionskrankheiten, Proteinanomalien (wie der Prionenerkrankung) und Autoimmunerkrankungen. Obwohl diese Tests eine gute Spezifität aufweisen, haben sie aufgrund ihrer Kosten, ihres Arbeitsaufwands und ihrer Dauer erhebliche Nachteile.
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Lernleitfaden
Medizin ➜
Blotting ist ein Verfahren zum Nachweis und zur Identifizierung von Makromolekülen wie Nukleinsäuren Nukleinsäuren Nukleinsäuren und Proteinen. Ermöglicht wird dies durch folgende Schritte:
Die 4 Grundtypen des Blottings sind
| Technik | Southern Blot | Northern Blot | Western Blot |
|---|---|---|---|
| Zielstruktur | DNA-Sequenzen | RNA-Sequenzen | Proteine Proteine Proteine und Peptide |
| Trennung | Elektrophorese | Elektrophorese | Elektrophorese |
| Blotting-Methode | Kapillartransfer | Kapillartransfer | Elektrophoretischer Transfer |
| Sonde | Oligonukleotide | Oligonukleotide | Antikörper |
| Gängige Nachweismethoden |
|
Alle Blotting-Techniken verwenden die Elektrophorese, bei der ein elektrisches Feld genutzt wird, um Moleküle zu trennen.
Blotting-Techniken folgen einem allgemeinen Verfahren:
Vorgehensweise beim Southern-Blotting:
A: DNA wird mit Restriktionsenzymen gespalten und mittels Elektrophorese getrennt.
B: DNA-Fragmente werden auf einen Nitrocellulosefilter geblottet.
C: Der Filter wird einer Lösung ausgesetzt, die eine radioaktiv markierte Sonde enthält, was eine Hybridisierung mit Ziel-DNA-Sequenzen ermöglicht.
D: Banden auf dem Filter werden dann zur Sichtbarmachung mit Röntgenfilm belichtet.
Vorgehensweise beim Western-Blotting:
A: Proteinproben werden auf ein Gel geladen und mittels Elektrophorese getrennt.
B: Die aufgetrennten Proteine werden elektrophoretisch auf eine Membran übertragen.
C: Die Membran wird mit einem für das Zielprotein spezifischen primären Antikörper inkubiert, der die Bildung von Antikörper-Antigen-Komplexen ermöglicht.
D: Die Membran wird erneut mit markierten Sekundärantikörpern inkubiert, die an die Primärantikörper binden.
E: In diesem Fall wird ein Substrat hinzugefügt, das mit den Markierungen interagiert, was den Nachweis über Chemilumineszenz ermöglicht.
SDS-PAGE: Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese
Western Blotting von Borrelia burgdorferi :
A, B und C: Positivkontrollen für spezifische monoklonale Antikörper
D und E: Individuen, die für IgM seropositiv sind
F: Positivkontrolle
G: Negativkontrolle
H: Weißkontrolle (phosphatgepufferte Kochsalzlösung)
MW: Molekulargewicht
Northern Blotting kann verwendet werden, um RNA-Spiegel und Genexpression zu bestimmen.
Identifizierung von Antikörpern:
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Simon Veiser beschäftigt sich seit 2010 nicht nur theoretisch mit IT Service Management und ITIL, sondern auch als leidenschaftlicher Berater und Trainer. In unterschiedlichsten Projekten definierte, implementierte und optimierte er erfolgreiche IT Service Management Systeme. Dabei unterstützte er das organisatorische Change Management als zentralen Erfolgsfaktor in IT-Projekten. Simon Veiser ist ausgebildeter Trainer (CompTIA CTT+) und absolvierte die Zertifizierungen zum ITIL v3 Expert und ITIL 4 Managing Professional.
Dr. Frank Stummer ist Gründer und CEO der Digital Forensics GmbH und seit vielen Jahren insbesondere im Bereich der forensischen Netzwerkverkehrsanalyse tätig. Er ist Mitgründer mehrerer Unternehmen im Hochtechnologiebereich, u.a. der ipoque GmbH und der Adyton Systems AG, die beide von einem Konzern akquiriert wurden, sowie der Rhebo GmbH, einem Unternehmen für IT-Sicherheit und Netzwerküberwachung im Bereich Industrie 4.0 und IoT. Zuvor arbeitete er als Unternehmensberater für internationale Großkonzerne. Frank Stummer studierte Betriebswirtschaft an der TU Bergakademie Freiberg und promovierte am Fraunhofer Institut für System- und Innovationsforschung in Karlsruhe.
Sobair Barak hat einen Masterabschluss in Wirtschaftsingenieurwesen absolviert und hat sich anschließend an der Harvard Business School weitergebildet. Heute ist er in einer Management-Position tätig und hat bereits diverse berufliche Auszeichnungen erhalten. Es ist seine persönliche Mission, in seinen Kursen besonders praxisrelevantes Wissen zu vermitteln, welches im täglichen Arbeits- und Geschäftsalltag von Nutzen ist.
Wolfgang A. Erharter ist Managementtrainer, Organisationsberater, Musiker und Buchautor. Er begleitet seit über 15 Jahren Unternehmen, Führungskräfte und Start-ups. Daneben hält er Vorträge auf Kongressen und Vorlesungen in MBA-Programmen. 2012 ist sein Buch „Kreativität gibt es nicht“ erschienen, in dem er mit gängigen Mythen aufräumt und seine „Logik des Schaffens“ darlegt. Seine Vorträge gestaltet er musikalisch mit seiner Geige.
Holger Wöltje ist Diplom-Ingenieur (BA) für Informationstechnik und mehrfacher Bestseller-Autor. Seit 1996 hat er über 15.800 Anwendern in Seminaren und Work-shops geholfen, die moderne Technik produktiver einzusetzen. Seit 2001 ist Holger Wöltje selbstständiger Berater und Vortragsredner. Er unterstützt die Mitarbeiter von mittelständischen Firmen und Fortune-Global-500- sowie DAX-30-Unternehmen dabei, ihren Arbeitsstil zu optimieren und zeigt Outlook-, OneNote- und SharePoint-Nutzern, wie sie ihre Termine, Aufgaben und E-Mails in den Griff bekommen, alle wichtigen Infos immer elektronisch parat haben, im Team effektiv zusammenarbeiten, mit moderner Technik produktiver arbeiten und mehr Zeit für das Wesentliche gewinnen.
Frank Eilers ist Keynote Speaker zu den Zukunftsthemen Digitale Transformation, Künstliche Intelligenz und die Zukunft der Arbeit. Er betreibt seit mehreren Jahren den Podcast „Arbeitsphilosophen“ und übersetzt komplexe Zukunftsthemen für ein breites Publikum. Als ehemaliger Stand-up Comedian bringt Eilers eine ordentliche Portion Humor und Lockerheit mit. 2017 wurde er für seine Arbeit mit dem Coaching Award ausgezeichnet.
Yasmin Kardi ist zertifizierter Scrum Master, Product Owner und Agile Coach und berät neben ihrer Rolle als Product Owner Teams und das höhere Management zu den Themen agile Methoden, Design Thinking, OKR, Scrum, hybrides Projektmanagement und Change Management.. Zu ihrer Kernkompetenz gehört es u.a. internationale Projekte auszusteuern, die sich vor allem auf Produkt-, Business Model Innovation und dem Aufbau von Sales-Strategien fokussieren.
Leon Chaudhari ist ein gefragter Marketingexperte, Inhaber mehrerer Unternehmen im Kreativ- und E-Learning-Bereich und Trainer für Marketingagenturen, KMUs und Personal Brands. Er unterstützt seine Kunden vor allem in den Bereichen digitales Marketing, Unternehmensgründung, Kundenakquise, Automatisierung und Chat Bot Programmierung. Seit nun bereits sechs Jahren unterrichtet er online und gründete im Jahr 2017 die „MyTeachingHero“ Akademie.
Als akkreditierter Trainer für PRINCE2® und weitere international anerkannte Methoden im Projekt- und Portfoliomanagement gibt Andreas Ellenberger seit Jahren sein Methodenwissen mit viel Bezug zur praktischen Umsetzung weiter. In seinen Präsenztrainings geht er konkret auf die Situation der Teilnehmer ein und erarbeitet gemeinsam Lösungsansätze für die eigene Praxis auf Basis der Theorie, um Nachhaltigkeit zu erreichen. Da ihm dies am Herzen liegt, steht er für Telefoncoachings und Prüfungen einzelner Unterlagen bzgl. der Anwendung gern zur Verfügung.
Zach Davis ist studierter Betriebswirt und Experte für Zeitintelligenz und Zukunftsfähigkeit. Als Unternehmens-Coach hat er einen tiefen Einblick in über 80 verschiedene Branchen erhalten. Er wurde 2011 als Vortragsredner des Jahres ausgezeichnet und ist bis heute als Speaker gefragt. Außerdem ist Zach Davis Autor von acht Büchern und Gründer des Trainingsinstituts Peoplebuilding.
Wladislaw Jachtchenko ist mehrfach ausgezeichneter Experte, TOP-Speaker in Europa und gefragter Business Coach. Er hält Vorträge, trainiert und coacht seit 2007 Politiker, Führungskräfte und Mitarbeiter namhafter Unternehmen wie Allianz, BMW, Pro7, Westwing, 3M und viele andere – sowohl offline in Präsenztrainings als auch online in seiner Argumentorik Online-Akademie mit bereits über 52.000 Teilnehmern. Er vermittelt seinen Kunden nicht nur Tools professioneller Rhetorik, sondern auch effektive Überzeugungstechniken, Methoden für erfolgreiches Verhandeln, professionelles Konfliktmanagement und Techniken für effektives Leadership.
Alexander Plath ist seit über 30 Jahren im Verkauf und Vertrieb aktiv und hat in dieser Zeit alle Stationen vom Verkäufer bis zum Direktor Vertrieb Ausland und Mediensprecher eines multinationalen Unternehmens durchlaufen. Seit mehr als 20 Jahren coacht er Führungskräfte und Verkäufer*innen und ist ein gefragter Trainer und Referent im In- und Ausland, der vor allem mit hoher Praxisnähe, Humor und Begeisterung überzeugt.